RT-PCR关键原料酶---逆转录酶，你会选了吗

什么是RT-PCR?

RT-PCR,反转录·聚合酶链反应（reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR）是将RNA的反转录（reverse transcription ）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平，细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。

RT-PCR关键原料酶---逆转录酶

逆转录酶主要包括以下三种活性：

①逆转录活性：以RNA为模板，催化dNTP聚合，生成DNA-RNA杂合双链。

②RNase H活性：水解杂合双链中的RNA，得到与RNA互补的DNA单链（cDNA）。它是病毒生命周期中复制循坏所必需的，能限制逆转录酶的合成长度。

③DNA指导的DNA聚合酶活性：以cDNA单链为模板，以dNTP为底物，再合成双链DNA。

目前通过深入研究的逆转录酶包含：

▸ 人类免疫缺陷病毒1型的逆转录（PDB：1HMV）

▸ 莫洛尼鼠白血病病毒的逆转录酶（MMLV）

▸ 禽成髓细胞瘤病毒的逆转录酶 （AMV）

▸ 维持真核细胞的染色体端粒存在的端粒酶逆转录酶

目前，分子PCR检测常用的两种逆转录酶：AMV和M-MLV。总的来说，虽然AMV的热稳定性好，对抗二级结构和高GC的能力强，但其合成cDNA的长度短，得率低，因此M-MLV是市场主流产品。目前，野生型M-MLV已可以通过基因改造弥补这些不足。

如何选择合适的逆转录酶？---国盛医学M-MLV逆转录酶

逆转录酶是由不同生化活性的不同结构酶组成，其中决定逆转录酶性能的主要取决于它的逆转录活性和RNaseH 活性，而逆转录活性又是和酶的热稳定性密切相关的。国盛医学通过基因工程技术获得了高灵敏变异的全新逆转录酶：

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